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  • 氮代谢物检测

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  • 对应法规:国标
    CNAS认可项目:是
  • 氮代谢是氨的同化及蛋白质等有机氮化合物的合成、分解的转化过程。同时它也是植物的基本生理过程之一,参与地球化学循环的重要组成部分,植物氮素同化的主要途径是经过硝酸还原为铵后直接参与氨基酸的合成与转化,期间硝基还原酶(NR)、谷氨酰胺合成酶(GS)、谷氨酰胺合酶(GOGAT)、天冬酰胺转氨酶(AspAT)等关键酶参与了催化和调节,以氨基酸为主要底物在细胞中合成蛋白质,再经过对蛋白质的修饰、分类、转运及储存等,成为植物有机体的组成部分,同时与植物的碳代谢等协调统一,共同成为植物生命活动的基本过程。

     

    检测方法

    百泰派克检测平台采用Agilent 1260 Infinity型高效液相色谱仪对样品进行分离,结合DAD检测器对样品进行鉴定或采用Thermo Scientific的U3000快速液相色谱对样品进行分离,结合Thermo Scientific™ Q Exactive™对样品进行鉴定,可高效、精准的检测氮代谢物的含量变化。目前可检测的氮代谢物包括尿素、肌氨酸酐、肌酸等。对于常见氮代谢物或以上氮代谢物的同类物质,可结合标样进行检测,对于稀有的氮代谢物分子,如提供标准样品,百泰派克可提供定制检测。对于氮代谢过程所需要的关键酶,百泰派克可提供试剂盒测定uedbetƊ。

    图 1. 标准样品(A)和尿样(B)中氮代谢物的液相色谱图

     

    样品制备

    植物氮代谢物的提取方法(此部分涉及到公司的核心工艺,以下提供常规的提取工艺)

    1)称量约20 mg的样品;

    2)液氮研磨;

    3)加入2 mL的甲醇超声提取30 min;

    4)离心,取1.5 mL滤液;

    5)旋干,加入0.5 mL甲醇复溶;

    6)0.45 μm的微孔滤膜过滤,用HPLC-MS检测。

     

    动物氮代谢物的提取方法(以尿液为例):

    1)取新鲜的晨尿2 mL;

    2)8000 rpm离心5 min;

    3)取1.5 mL上清液;

    4)用乙酸铵缓冲液稀释10倍;

    5)0.45 μm的微孔滤膜过滤,用HPLC检测。

     

    检测uedbetƊ列表

    可测物质

    周期

    谷氨酰胺合成酶(GS)

    2-3

    硝酸还原酶(NR)

    2-3

    谷氨酸合成酶(GOGAT)

    2-3

    谷氨酸脱氢酶(GDH)

    2-3

    谷氨酰胺酶(GLS)

    2-3

    亚硝酸还原酶(NiR)

    2-3

    植物硝态氮

    2-3

    植物铵态氮

    2-3

    尿素氮

    2-3

    脲酶(UE)

    2-3

    NO含量

    2-3

    水土中亚硝酸盐

    2-3

    食品中亚硝酸盐

    2-3

    其他氮代谢类物质

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