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  • 三羧酸循环(TCA循环)检测

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  • 对应法规:国标
    CNAS认可项目:是
  • (tricarboxylic acid cycle)是需氧生物体内普遍存在的代谢途径,分布在线粒体。因为在这个循环中几个主要的中间代谢物是含有三个羧基的有机酸,所以称为三羧酸循环,又称为柠檬酸循环或者是TCA循环;也以发现者Hans Adolf Krebs命名为Krebs循环。三羧酸循环是三大营养素(糖类、脂类、氨基酸)的最终代谢通路,又是糖类、脂类、氨基酸代谢联系的枢纽。

     

    检测方法

    百泰派克检测平台采用Agilent 1260 Infinity型高效液相色谱仪对样品进行分离,DAD检测器鉴定,该方法可以高效、精准的检测三羧酸循环代谢物的含量变化。目前可检测的包括柠檬酸、丙酮酸和琥珀酸酸等。对于常见三羧酸循环代谢物或以上三羧酸循环代谢的同类物质,可配合标样进行检测,对于稀有的三羧酸循环代谢物,如提供标准样品,可提供定制检测。对于在三羧酸循环过程中的酶类物质,结合相应的试剂盒采用生化法检测。

    图1添加柠檬酸对代谢产物琥珀酸的影响

     

    样品制备

    代谢物提取方法(此部分涉及到公司的核心工艺,以下仅为常规提取工艺)

    1. 取10 mL左右的样品;
    2. 5℃,12000rpm离心10 min;
    3. 取上清;
    4. 0.45 μm的微孔滤膜过滤,用HPLC检测。

     

    检测uedbetƊ列表

    可测物质

    周期

    柠檬酸(CA)含量

    2-3

    乙酰辅酶A

    2-3

    丙酮酸(PA)

    2-3

    乳酸

    2-3

    线粒体异柠檬酸脱氢酶

    2-3

    α-酮戊二酸脱氢酶(α-KGDH)

    2-3

    琥珀酸脱氢酶(SDH)

    2-3

    丙酮酸脱氢酶(PDH)

    2-3

    线粒体柠檬酸(MCA)含量

    2-3

    6-磷酸葡萄糖酸酯

    2-3

    2-磷酸甘油酸/3-磷酸甘油酸

    2-3

    乙酰

    2-3

    葡萄糖腺苷二磷酸

    2-3

    柠檬酸

    2-3

    磷酸二羟丙酮

    2-3

    DL-α-羟基戊二酸

    2-3

    4-磷酸-赤藓糖

    2-3

    1,6-二磷酸果糖

    2-3

    1-磷酸果糖

    2-3

    6-磷酸果糖

    2-3

    葡萄糖

    2-3

    1,6-二磷酸葡萄糖

    2-3

    1-磷酸葡萄糖

    2-3

    6-磷酸葡萄糖

    2-3

    3-磷酸甘油醛

    2-3

    3-磷酸甘油

    2-3

    乙醇酸

    2-3

    异柠檬酸

    2-3

    乳酸

    2-3

    苹果酸

    2-3

    丙二酰辅酶A

    2-3

    1-磷酸甘露糖

    2-3

    6-磷酸甘露糖

    2-3

    NAD+

    2-3

    NADH

    2-3

    NADP+

    2-3

    NADPH

    2-3

    草酰乙酸

    2-3

    磷酸烯醇丙酮酸

    2-3

    丙酮酸

    2-3

    5-磷酸核糖

    2-3

    5-磷酸核酮糖

    2-3

    7-磷酸景天庚糖

    2-3

    琥珀酸

    2-3

    琥珀酰辅酶A

    2-3

    二磷酸尿苷葡糖

    2-3

    5-磷酸木糖

    2-3

    α-酮戊二酸

    2-3

    ADP

    2-3

    AMP

    2-3

    ATP

    2-3

    cAMP

    2-3

    GDP      

    2-3

    GTP

    2-3

    UDP

    2-3

    其他三羧酸循环类物质

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